重組霍亂毒素B亞基 血清
簡要描述：
重組霍亂毒素B亞基 血清霍亂毒素（Cholera toxin，CTX）是霍亂弧菌產(chǎn)生的毒力因子，會引起嚴重腹瀉以及人體脫水。CTX屬于AB5亞基家族。天然六聚體蛋白含兩個亞基，分子量約85kDa。
產(chǎn)品時間：2025-06-04
打印當前頁Recombinant Cholera Toxin B subunit, CF594-conjugated
重組霍亂毒素B亞基（CF594標記，紅色熒光）
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
重組霍亂毒素B亞基（CF594標記，紅色熒光） | MX0941-100UG | 100μg | 4786 |
背景描述
霍亂毒素（Cholera toxin，CTX）是霍亂弧菌產(chǎn)生的毒力因子，會引起嚴重腹瀉以及人體脫水。CTX屬于AB5亞基家族。天然六聚體蛋白含兩個亞基，分子量約85kDa。由一個A亞基（約27.2kDa）和五個B亞基（約11.6kDa/亞基）組成，B亞基以五聚體環(huán)的方式排列，呈明顯的五度對稱，負責毒素識別并吸附細胞表面的神經(jīng)jie苷脂GM1。
A亞基催化刺激性G蛋白α亞基（Gαs）的ADP核糖基化，降低GTPase活性和活化α亞基。Gαs的活化引起腺苷酸環(huán)化酶（AC）活性增加，進而促使cAMP水平提高。A亞基還能ADP核糖基化視桿細胞外節(jié)膜盤的轉運蛋白，使得GTPase失活。霍亂毒素還是一種高效的黏膜疫苗佐劑，通過抑制IL-12生產(chǎn)來誘導2型輔助性T細胞的免疫應答。
霍亂毒素B亞基（CTB）對細胞無毒，本質(zhì)上不含腺苷酸環(huán)化酶活性。CTB通過結合神經(jīng)jie苷脂GM1附著到細胞上，是小膠質(zhì)細胞的良好標記物（這類細胞表面富含神經(jīng)jie苷脂GM1），但不適合標記少突膠質(zhì)細胞或星形膠質(zhì)細胞。CTB是利用組化方法研究軸突運輸?shù)膬?yōu)秀示蹤劑。CTB也是常用的脂筏標記物，脂筏是富含膽gu醇和鞘脂的膜微區(qū)，在細胞信號轉導和蛋白質(zhì)運輸中發(fā)揮重要作用。
產(chǎn)品描述
本品是偶聯(lián)上紅色熒光素-CF594（Ex/Em=593/614nm）的重組霍亂毒素B亞基（rCTB），即Recombinant Cholera Toxin B subunit, CF594-conjugated，簡寫：CF594 conjugated- rCTB，適用于神經(jīng)學研究中的束路追蹤，靶向神經(jīng)jie苷脂GM1）結合和逆行運輸。也可在活細胞或固定細胞成像中用作脂筏標記物和內(nèi)吞示蹤劑。
保存與運輸方法
保存：-20℃保存，至少6個月有效。
運輸：冰袋運輸。
注意事項
1） 本品以凍干粉形式提供，由于量比較少，初次使用前需置于室溫回溫至少30min，低速離心后，再開蓋直接往瓶內(nèi)加入合適的溶劑進行溶解。
2） CF系列熒光染料是Biotium的注冊商標，Alexa Fluor和DyLight系列染料是Thermo Fisher的注冊商標，Cy系列染料是Cytiva的注冊商標。
3） 本品僅供科研用途，絕不可以用于臨床或診療用途。
4） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法
以下是用熒光標記的rCTB對細胞進行標記的實驗流程。對于其他的應用（比如：神經(jīng)示蹤），請根據(jù)應用查找相應的文獻作為參考。
一、 自行準備材料
1.1 磷酸鹽緩沖液（PBS）（比如：MS3552-500ML）
1.2 牛血清白蛋白（BSA）（比如：MP6101-5G）
1.3 HBSS（比如：MS3505-500ML）
1.4 4%多聚甲醛（比如：MM1504-500ML）
1.5 【可選】Hoehcst 33342（比如：MX4203-10MG，MX4203-1ML，MX4204-10ML）
二、 染料準備
重溶：將低溫保存的CF594 conjugated- rCTB（規(guī)格：100μg）置于室溫回溫至少30min，低速離心3-5min，將粉末離心至管底。直接往瓶子加入100μl無菌水或1×PBS使其充分溶解，即得到1mg/ml的母液。
保存：新鮮制備的CF594 conjugated- rCTB（1mg/ml）置于+4℃避光保存，3個月穩(wěn)定。亦可根據(jù)單次用量分裝后，置于-20℃避光保存，6個月穩(wěn)定，避免反復凍融。
三、 活細胞的表面標記
3.1用4℃預冷的HBSS+0.5% BSA清洗細胞一次；
3.2用4℃預冷的HBSS+0.5% BSA稀釋CF594 conjugated- rCTB（1mg/ml）到工作濃度：400ng/ml-1μg/ml。
3.3吸走細胞內(nèi)的緩沖液，加入新鮮配置的CF594 conjugated- rCTB染色工作液。+4℃避光孵育30min。
3.4用4℃預冷的HBSS+0.5% BSA清洗細胞三次；
3.5用4%多聚甲醛固定細胞，+4℃避光固定15min。
3.6用PBS清洗細胞二次，之后進行成像或接著做后續(xù)的染色?！咀ⅲ焊鶕?jù)實驗需求，考慮是否加入核復染劑-Hoechst 33342等】
應用實例（來自文獻，僅做參考）
Yasuda M, Nagappan-Chettiar S, Johnson-Venkatesh EM, Umemori H. An activity-dependent determinant of synapse elimination in the mammalian brain. Neuron. 2021 Apr 21;109(8):1333-1349.e6. doi: 10.1016/j.neuron.2021.03.006. Epub 2021 Mar 25. PMID: 33770504; PMCID: PMC8068677.
實驗目的：視網(wǎng)膜膝狀體投射的順行標記
實驗方法：小動物麻醉后，眼內(nèi)注射CF594或CF660R標記的霍亂毒素B亞基（CTB,1mg/ml in PBS）進入眼內(nèi)標記P2或P14位的RGC軸突。CTB注射后24h（P3或P15），小鼠經(jīng)心臟灌流PBS，之后灌注4%多聚甲醛（PBS）。摘除大腦和眼睛，之后置于4%多聚甲醛（PBS）固定過夜，進行后續(xù)分析。
示例圖片：
Fig 2(J–N) JAK2 activation promotes eye-specific segregation. (J) Schematic diagram of RGC projections to the dLGN, labeled with CTB (CF594 = green; CF660R = pink). Chx10-Cre;SOCS3fl/fl (SOCS3 KORGC) mice received intraocular injections of CTB at P14. dLGNs were analyzed at P15. (K) Projection patterns of Control and SOCS3 KORGC RGC axons to the dLGN.“Overlap"shows the overlapped region between CTB594 and CTB660R signals (5% intensity threshold).
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MX0944-100UG | 重組霍亂毒素B亞基（CF568標記，紅色熒光） | 100μg |
MS3505-500ML | 1×Hanks平衡yan溶液（含鈣鎂，無酚紅） | 500ml |
MP6101-5G | BSA, Standard Grade牛血清白蛋白（標準級別） | 5g |
附錄I幾款CF染料的光譜特征
CF488A | CF568 | CF594 | CF647 | CF680R | |
最大Abs/Em | 490/515 nm | 562/584 nm | 593/614 nm | 650/665 nm | 680/701 nm |
摩爾吸光系數(shù) | 70,000 | 100,000 | 115,000 | 240,000 | 140,000 |
分子量 | ~914 | ~714 | ~730 | ~836 | ~912 |
激發(fā)激光線 | 488nm | 532 nm or 568 nm | 561 to 568 nm | 633 or 635 nm | 680 or 685 nm |
可替代染料 | Alexa Fluor 488 Cy2 DyLight 488 FITC | Alexa Fluor 568 ATTO 565 Rhodamine Red | Alexa Fluor594 Texas Red DyLight 594 | Alexa Fluor647 Cy5 DyLight 649 | Alexa Fluor680 Cy5.5 DyLight 680 IRDye 680LT |
應用 | 熒光顯微鏡 共聚焦顯微鏡 流式細胞儀 超分辨率成像（STED、TIRF） | 共聚焦顯微鏡 單分子成像 超分辨率成像（SIM, TIRF, STED，多色STORM） | 熒光顯微鏡 共聚焦顯微鏡 流式細胞儀 | 熒光顯微鏡 共聚焦顯微鏡 流式細胞儀 超分辨率成像（多色STORM） | 小動物成像儀 超分辨率成像（多色STORM、3D） |
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
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